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          細胞分離液分離純化細胞操作
          點擊次數(shù):3689 更新時間:2018-05-24
             細胞分離液分離純化細胞操作
            
            細胞分離液欄目主要提供淋巴細胞分離液、ficoll分離液以及多種細胞分離液試劑盒產(chǎn)品。
            
            細胞分離液原理:
            
            細胞分離液是一種包有乙烯吡咯烷酮的硅膠顆粒。滲透壓很低(<20mosm/kgH2O),粘度也很小,可形成高達1.3g/ml密度,采用預先形成的密度梯度時可在低離心力(200~1000g)于數(shù)分至數(shù)十分鐘內達到滿意的細胞分離結果。由于Percoll擴散常數(shù)低,所形成的梯度十分穩(wěn)定。此外,Percoll不穿透生物膜,對細胞無毒害,因此廣泛用于分離細胞、亞細胞成分、細菌及病毒,還可將受損細胞及其碎片與完好的活細胞分離。
            
            細胞分離液分離純化細胞舉例
            
            1.富含NK活性大顆粒淋巴細胞(LGL)的純化:按順序由下向上逐層加50%、47.5%、45%、42.5%和40%五種不同密度的Percoll,如用10ml試管(或塑料管)分離,每層Percoll約1.2~1.5ml,初步從外周血中分離的PBMC細胞1×108懸于1ml培基中,按要求裝樣、離心和取樣。一般富含NK殺傷活性的LGL細胞位于42.5%與45%Percoll界面以及上下二層的Percoll液中。
            
            2.純化淋巴母細胞和除去死細胞:分別疊加50%和30%Percoll液。收取經(jīng)PHA(或其它抗原、有絲分裂原)刺激PBMC,或含有較高比例異型的PBMC(如腎綜合征出血熱患者),按要求裝樣、離心和取樣。位于管底的淋巴細胞為小淋巴細胞;兩層Percoll之間為淋巴母細胞,純度和回收率在80%以上,位于30%Percoll表面是死細胞。收獲淋巴母細胞可進行表型、結構以及功能的研究。
            
            

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