GENMED血液維生素A高效液相色譜法定量檢測試劑盒產品說明書（中文版）

主要用途

GENMED血液維生素A高效液相色譜法定量檢測試劑是一種旨在通過抗氧化處理和有機溶劑萃取，進而在高效液相色譜儀和紫外光譜下（325nm波長）檢測分析，分離出維生素A即視黃醇波峰，以定量測定樣品中維生素A含量的經典技術方法。該技術經過精心研制、成功實驗證明的。其適用于人體、動物等血液（血漿、血清）樣品中維生素A及其衍生物，例如視黃醇（retinol）、視黃醛（retinaldehyde）、視黃酸（retinoic acid）、3-脫氫視黃醇（3-dehydroretinol；vitamin A2）、維生素 A 棕櫚酸酯（retinol palmitate）和維生素A乙酸酯（retinol acetate）的檢測。產品嚴格無菌，即到即用，操作簡捷，性能穩定。

技術背景

視黃酸類（retinoid）是維生素A（Vitamin A）及其相關衍生物的統稱，其中包括視黃醇（retinol）、視黃醛（retinaldehyde）、視黃酸（retinoic acid）等。維生素A的結構形式包括視黃醇（vitamin A1）及其酯類、3-脫氫視黃醇（3-dehydroretinol；vitamin A2）及其酯類，視黃醛、視黃酸、新維生素A（neovitamin A）等。維生素A在肝臟脂肪組織里以酯類形式儲存，維生素 A 棕櫚酸酯（retinol palmitate）和維生素A乙酸酯（retinol acetate），占5%，而95%以水解形式，在體內循環。維生素A在維護動物和人體眼睛、呼吸和生殖系統的上皮組織，以及骨發育的正常功能方面起著主要作用。維生素A缺陷將導致眼球干燥癥（xerophthalmia）、皮膚異常、易發感染；維生素A中毒會出現困倦（drowsiness）、顱壓（cranial pressure）增加、血鈣過高（hypercalcemia）、脫發、高胡蘿卜素血癥（hypercarotenemia）等。通過抗氧化處理和有機溶劑萃取，進而在高效液相色譜儀和紫外光譜下（325nm波長）檢測分析，分離出維生素A，即視黃醇波峰，以定量分析維生素A的含量。

產品內容

GENMED緩沖液（Reagent A）       10毫升

GENMED萃取液A（Reagent B）        20毫升

GENMED萃取液B（Reagent C）       40毫升

GENMED去干擾液（Reagent D）       20毫升

GENMED溶解液（Reagent E）        5毫升

GENMED流相液（Reagent F）      500毫升

GENMED標準液（Reagent G）      500微升

產品說明書      1份

保存方式

保存GENMED緩沖液（Reagent A）、GENMED萃取液A（Reagent B）和GENMED標準液（Reagent G）在-20℃冰箱里，其余的保存在4℃冰箱里，GENMED標準液（Reagent G）避免光照；試劑具有揮發性，注意密閉瓶蓋；GENMED萃取液B（Reagent C）、GENMED去干擾液（Reagent D）和GENMED流相液（Reagent F）具有腐蝕性，注意操作安全；有效保證3月

用戶自備

1.5毫升離心管：用于樣品處理和標準液配制的容器

2毫升離心管：用于樣品操作的容器

15毫升錐形離心管：用于樣品操作的容器

（微型）臺式離心機：用于樣品處理

干式培養箱或離心濃縮儀：用于樣品干化

高效液相色譜儀（HPLC）：用于定量測定

實驗步驟

• 樣品準備 

• 血漿樣品準備

• 準備好EDTA抗凝管
• 抽取1毫升血液，置于抗凝管里
• 放進4℃微型臺式離心機離心10分鐘，速度為700g（或3000RPM，例如eppendorf 5415）
• 小心移取上層黃色液體到新的1.5毫升離心管――此為血漿成分（注意：避免觸碰白色液體層）
• （選擇步驟）即刻置于冰槽里備用或放進－70℃冰箱里保存
• 移取500微升血漿到15毫升錐形離心管
• 加入500微升GENMED緩沖液（Reagent A），混勻
• 加入1毫升GENMED萃取液A（Reagent B）
• 渦旋震蕩20秒
• 加入2毫升GENMED萃取液B（Reagent C）
• 渦旋震蕩1分鐘
• 放進臺式離心機離心5分鐘，速度為1000g 
• 移取2毫升上層液相到2毫升離心管
• 放進40℃干式培養箱晾干或離心濃縮儀揮干
• 加入100微升GENMED溶解液（Reagent E），混勻，避免光照
• 即刻進行后續高效液相色譜分析

• 血清樣品準備

• 準備好不含抗凝劑的儲存管 
• 抽取1毫升血液，置于儲存管里
• 室溫下，靜置30分鐘，直至血液凝結
• 放進4℃微型臺式離心機離心15分鐘，速度為2000g（或5000RPM，例如eppendorf 5415）
• 小心移取上層黃色液體到新的1.5毫升離心管――此為血清成分（注意：避免觸碰白色液體層）
• （選擇步驟）即刻置于冰槽里備用或放進－70℃冰箱里保存
• 移取200微升血清到新的2毫升離心管
• 加入200微升GENMED緩沖液（Reagent A），混勻
• 加入400微升GENMED萃取液A（Reagent B）
• 渦旋震蕩20秒
• 加入800微升GENMED去干擾液（Reagent D）
• 渦旋震蕩1分鐘
• 放進臺式離心機離心5分鐘，速度為8500g
• 移取800微升下層液相到2毫升離心管
• 放進40℃干式培養箱晾干或離心濃縮儀揮干
• 加入100微升GENMED溶解液（Reagent E），混勻，避免光照
• 即刻進行后續高效液相色譜分析

• 測定準備

• 開啟儀器預熱15分鐘
• 根據下表設置高效液相色譜儀（HPLC）參數

• 使用GENMED流相液（Reagent F）運行1次（30毫升），以達到色譜柱均衡和溫度穩定

• 標準樣品配制

• 準備好5個1.5毫升離心管，標記為1至5號管
• 分別加入100微升GENMED溶解液（Reagent E）到1至5號管
• 移取100微升GENMED標準液（Reagent G）到1號管，混勻
• 小心移取100微升1號管稀釋的GENMED標準液（Reagent G）到2號管，混勻
• 小心移取100微升2號管稀釋的GENMED標準液（Reagent G）到3號管，混勻
• 小心移取100微升3號管稀釋的GENMED標準液（Reagent G）到4號管，混勻
• 將1至5號管放進冰槽里備用，避免光照；標準管濃度見下表

四、色譜分析

• 將上述配制的GENMED標準液（Reagent G）和待測樣品放進30℃培養箱預熱
• 每次（每個樣品）注射100微升
• 每次（每個樣品）運行10至20分鐘
• 獲得色譜波峰圖：波峰面積（peak area）或峰值，保存記錄
• 全部運行完成，使用適量的GENMED流相液（Reagent F）清洗色譜柱

五、計算含量

• 方法一：通過儀器中的軟件進行測算
• 方法二：構建標準曲線：縱座標（Y軸）為波峰面積（peak area）；橫座標（X軸）為標準視黃醇濃度（微克/毫升），根據標準曲線獲得樣品對應視黃醇濃度（微克/毫升）
• 方法三：公式計算（選擇單一濃度的標準液）

樣本視黃醇濃度（微克/毫升）=【樣本波峰面積（peak area）X標準視黃醇濃度】÷對應標準視黃醇濃度的波峰面積

 注意事項

• 本產品為20次操作 
• 本產品可以用于視黃醇（retinol）、視黃醛（retinaldehyde）、視黃酸（retinoic acid）、3-脫氫視黃醇（3-dehydroretinol；vitamin A2）、維生素 A 棕櫚酸酯（retinol palmitate）和維生素A乙酸酯（retinol acetate）等的檢測
• 本產品檢測范圍是0.3至50毫克/升
• 操作時，須戴手套
• 試劑具有揮發性，注意密閉瓶蓋或使用封口膜
• 樣品避免光照
• 樣品建議新鮮采集，避免溶血
• GENMED萃取液B（Reagent C）、GENMED去干擾液（Reagent D）和GENMED流相液（Reagent F）具有腐蝕性，注意操作安全
• 色譜柱的異物殘留、氣泡產生、溫度未達均衡等將導致異常波峰、時間偏移等
• 用戶可以使用已知濃度的GENMED標準液（Reagent G）作為內參標準加入到樣品中，檢測回收率（recovery）
• 維生素A的HPLC參考圖譜如下

• 維生素A及其衍生物的出峰時間（retention）以用戶操作時，使用的GENMED標準液（Reagent G）實際出峰為準
• 本公司提供系列維生素檢測試劑產品

質量標準

• 本產品經鑒定性能穩定
• 本產品經鑒定檢測敏感

使用承諾

秉著“信譽至上、客戶滿意、質量承諾”的宗旨為我們的用戶提供優質產品和服務。用戶收到貨后，應按照產品說明書上的規定妥善保管并在有效期內使用。我們的產品在銷售前已作嚴格的質量鑒定，保證說明書所述的使用效果。在貨到后10天內若發現確屬本產品的質量問題，請立即以書面形式（實驗報告）與本公司聯系，并將該產品退回，經檢驗確系產品質量所致，本公司負責更換產品。如系使用者錯誤操作所致，本公司不承擔由此造成的損失。

友情提醒

IF IT DOESN’T WORK， RECHECK YOUR EXPERIMENT TO SEE WHAT YOU DID WRONG。

訂購信息

單組份訂購信息

編號 名稱 規格

GMS19066.2.2 GENMED血液維生素A高效液相色譜法定量檢測試劑盒 20次

GMS19066.2.2A GENMED緩沖液（Reagent A）     100毫升

GMS19066.2.2B GENMED萃取液A（Reagent B） 100毫升

GMS19066.2.2C GENMED萃取液B（Reagent C）      100毫升

GMS19066.2.2D GENMED去干擾液（Reagent D） 100毫升

GMS19066.2.2E GENMED溶解液（Reagent E） 50毫升

GMS19066.2.2F  GENMED流相液（Reagent F） 500毫升

GMS19066.2.2G  GENMED標準液（Reagent G）      1毫升

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