博來霉素（Bleomycin）與鐵的復(fù)合物嵌入DNA，引起DNA單鏈和雙鏈斷裂。不引起RNA鏈斷裂。作用的第一步是本品的二噻唑環(huán)嵌入DNA的G-C堿基對之間，同時末端三肽氨基酸的正電荷和DNA磷酸基作用，使其解鏈。作用的第二步是本品與鐵的復(fù)合物導(dǎo)致超氧或羥自由基的生成，引起DNA鏈斷裂。口服無效，需經(jīng)肌內(nèi)或靜脈注射。
博萊霉素應(yīng)用領(lǐng)域：
可選擇Sh ble基因表達(dá)的細(xì)胞。與現(xiàn)在使用的其他動物細(xì)胞標(biāo)記物無交叉抗性
因此這種抗生素可用來分離對其他篩選劑（如：慶大霉素，潮霉素）有抗性的克隆。Zeocin是一種屬于爭光霉素家族的糖蛋白抗生素，在體內(nèi)能作用于大多數(shù)細(xì)菌（包括E. coli）、真菌（如：酵母菌）、植物細(xì)胞、動物細(xì)胞。
博萊霉素溶液的配制方法：
1. 先將使用到的所有器具高溫滅菌，儀器表面、工作臺面消毒。
2. 在分析天平上稱取博萊霉素粉末0.500 g，加10 mL無菌水溶液溶解。
3. 用0.2微米濾膜過濾除菌到無菌容器中，然后分裝到 1.5 mL EP管中。
不建議使用螺旋蓋管子，容易污染。-20度保存。
為避免污染和反復(fù)凍融，建議分裝成小規(guī)格的，如500 uL。
博萊霉素使用辦法：
1、液體Zeocin可用于細(xì)胞培養(yǎng)。
2、用于篩選轉(zhuǎn)化株的Zeocin濃度根據(jù)PH值和鹽濃度改變。
3、PH越高，鹽濃度越低Zeocin活性越大。
4、普通大腸桿菌菌株篩選可在25 ?g/ml zeocin濃度的低鹽LB瓊脂培養(yǎng)基中進(jìn)行，PH調(diào)至7.5 。
5、動物細(xì)胞篩選：根據(jù)不同細(xì)胞系從100 到 750 ?g/ml 。
6、植物細(xì)胞篩選：根據(jù)不同的細(xì)胞種類和培養(yǎng)基從50 到 250 ?g/ml 。
執(zhí)照.jpg)
