細(xì)胞名稱          B95-8絨猴EBV轉(zhuǎn)化的白細(xì)胞 

種屬            絨猴 

組織來(lái)源          外周血 

生長(zhǎng)狀態(tài)          懸浮細(xì)胞 

培養(yǎng)條件          培養(yǎng)基類型：RPMI1640培養(yǎng)基 

              FBS:10% 

              抗生素：雙抗 

              培養(yǎng)條件：37℃，CO2:5% 

傳代方法          收到細(xì)胞后，在倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)： 

                  如果沒(méi)長(zhǎng)滿，將培養(yǎng)瓶用75%酒精消毒后在超凈臺(tái)內(nèi)更換新鮮 

              培養(yǎng)液，繼續(xù)培養(yǎng)。 

                  如果細(xì)胞已經(jīng)長(zhǎng)滿（約80%-90%）則傳代后繼續(xù)培養(yǎng)。 

              貼壁細(xì)胞傳代方法： 

              1棄去培養(yǎng)基，用不含鈣、鎂離子的PBS洗1-2次。 

              2加1ml0.25%的胰酶（含0.02%EDTA），讓胰酶與大部分細(xì)胞接觸 

              后放入37℃培養(yǎng)箱內(nèi)，隨時(shí)觀察細(xì)胞狀態(tài)變化，待細(xì)胞大部分變 

              圓后加*培養(yǎng)基終止消化。 

              懸浮細(xì)胞傳代方法：可以直接傳代也可以離心法傳代。 

              1直接傳代是讓懸浮細(xì)胞慢慢沉淀在瓶底后，將上清吸掉1/2-2/3， 

              吹打細(xì)胞形成細(xì)胞懸液后，分別接種到其他培養(yǎng)皿或培養(yǎng)瓶中繼續(xù) 

              培養(yǎng)。 

              2離心法傳代是將細(xì)胞連同培養(yǎng)液一并轉(zhuǎn)移到離心管內(nèi)，1000rpm， 

              5分鐘，去除上清，加新的培養(yǎng)液到離心管內(nèi)，吹打細(xì)胞形成細(xì)胞 

              懸液后，分別接種到其他培養(yǎng)皿或培養(yǎng)瓶中繼續(xù)培養(yǎng)。 

               一般沒(méi)有特殊說(shuō)明，細(xì)胞一般是一傳二。 

凍存方法          70%*培養(yǎng)基，20%FBS，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。 

              儲(chǔ)存：液氮中長(zhǎng)期保存。 

注             1觀察細(xì)胞在低倍鏡下觀察，便于整體估計(jì)細(xì)胞密度。 

              2在運(yùn)輸過(guò)程中可能會(huì)導(dǎo)致一些貼壁不牢的細(xì)胞發(fā)生部分脫落，可 

              離心吹打后重新種入瓶中培養(yǎng)。 

              3收到細(xì)胞后若發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)瓶破損、細(xì)胞污染等，請(qǐng)?jiān)谝恢軆?nèi)與我們 

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