腸桿菌是原核生物，只有核糖體，只能形成多肽（肽鏈）。而胰島素是蛋白質，利用大腸桿菌等微生物表達生產胰島素的過程中，表達產物常常形成包涵體，而不是分泌出來。要通過變性和復性過程才能得到有活性的人胰島素。
通過基因工程，將人胰島素基因A、B鏈的人工合成基因分別組合到大腸桿菌的不同質粒上，然后再移至菌體內，這種重組質粒在大腸桿菌細胞內進行正常的復制和表達，從而使帶有A、B鏈基因的工程菌株分別產生人胰島素A、B鏈，然后再用人工的方法，在體外通過二硫鍵使這2條鏈連接成有活性的人胰島素。現在大都已經改為用酵母菌、昆蟲培養細胞、或哺乳動物培養細胞等真核細胞作為表達載體，可以直接分泌胰島素。