注意：正式測定前務必取2-3個預期差異較大的樣本做預測定

規格：100T/96S

產品內容：

試劑一：液體 42mL×1 瓶，4℃避光保存。

試劑二：粉劑×1 瓶，4℃保存。用前加 100mL 蒸餾水充分溶解。

試劑三：液體 2.5mL×1 瓶，4℃保存。

試劑四：粉劑×1 支，4℃避光保存。臨用前加 576µL 無水乙醇 (自備) ，24µL 蒸餾水充分溶解。 (變褐色后不能再使用)

標準品：液體 1mL×1 支，0.5 µmol/mL 苯酚標準液，4℃保存。

產品說明：

土壤磷酸酶是一類催化土壤有機磷礦化的酶，其活性的高低直接影響著土壤中有機磷的分解轉 化及其生物有效性，是評價土壤磷素生物轉化方向與強度的指標。土壤磷酸酶受到土壤碳、氮含量、有 效磷含量和 pH 顯著影響，根據最適 pH 范圍，通常分為酸性、中性和堿性三種類型。

堿性環境中，S-AKP/ALP 催化磷酸苯二鈉水解生成苯酚和磷酸氫二鈉，通過測定酚的生成量即 可計算出 S-AKP/ALP 活性。

試驗中所需的儀器和試劑：

分光光度計/酶標儀、微量比色皿/96 孔板、臺式離心機、37℃恒溫培養箱、分析天平、可調式 移液器、冰、蒸餾水、乙醇和甲苯。

操作步驟：

一、粗酶液提取：

稱取風干混勻土壤約 0. 1g ，加入 0.05mL 甲苯 (自備) ，輕搖 15min ；加 0.4 mL 試劑一并且搖 勻后，置于 37℃恒溫培養箱，開始計時，催化反應 24h；到時后迅速加入 1mL 試劑二充分混勻，以 終止酶催化的反應。10000rpm 室溫離心 10min ，取上清液置于冰上待測。

二、測定步驟：

(1)  分光光度計/酶標儀預熱 30 min 以上，調節波長到 660 nm ，蒸餾水調零。

(2)  空白管：取微量比色皿/酶標板，加入 10 µL 試劑一，20 µL 試劑三，4 µL 試劑四，充分混  勻，顯色后再加蒸餾水 166µL ，混勻后室溫靜置 30 min ，于 660 nm 測定吸光度，記為 A 空白管。

(3)  標準管：取微量比色皿/酶標板，加入 10 µL 標準液，20 µL 試劑三，4 µL 試劑四，充分混  勻，顯色后再加蒸餾水 166µL ，混勻后室溫靜置 30 min ，于 660 nm 測定吸光度，記為 A 標準管。

(4)  測定管：取微量比色皿/酶標板，加入 10 µL 上清液，20 µL 試劑三，4 µL 試劑四，充分混  勻，顯色后再加蒸餾水 166µL ，混勻后室溫靜置 30 min ，于 660 nm 測定吸光度，記為 A 測定管。 注意：空白管和標準管只需要測定一次。

S-AKP/ALP 活性計算：

活性單位定義：37℃中每克土壤每天釋放 1nmol 酚為 1 個酶活單位。

S-AKP/ALP  ( nmol/d/g ) =[C 標準液 ×(A 測定管－ A 空白管)÷(A 標準管－ A 空白管)]×V 總

÷W÷T×1000

=725×(A 測定管－A 空白管)÷(A 標準管－A 空白管)÷W

C 標準液：0.5 µmol/mL；  V 總：催化體系總體積，1.45mL；W：土壤樣品質量，g；T ：催化 反應時間，24 h=1 d；1000：單位換算系數，1µmol=1000nmol。

注：線性范圍為 0.03125µmol/mL-2.5µmol/mL

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