在ELISA中，進行各項實驗條件的選擇是很重要的，其中包括：

　　固相載體的選擇：許多物質可作為固相載體，如聚氯乙烯、聚苯乙烯、聚丙酰胺和纖維素等。其形式可以是凹孔平板、試管、珠粒等。目前常用的是40孔聚苯乙烯凹孔板。不管何種載體，在使用前均可進行篩選：用等量抗原包被，在同一實驗條件下進行反應，觀察其顯色反應是否均一性，據此判明其吸附性能是否良好。

　　包被抗體（或抗原）的選擇：將抗體（或抗原）吸附在固相載體表面時，要求純度要好,吸附時一般要求PH在9.0～9.6之間。吸附溫度，時間及其蛋白量也有一定影響,一般多采用4℃18～24小時。蛋白質包被的適濃度需進行滴定：即用不同的蛋白質濃度（0.1、1.0和10μg／ml等）進行包被后，在其它試驗條件相同時，觀察陽性標本的OD值。選擇OD值大而蛋白量少的濃度。對于多數蛋白質來說通常為1～10μg／ml。

　　為了確保實驗的成功，ELISA試劑盒實驗中需留心下列的細節

　　1、嚴格按照規定的時刻和溫度進行溫育以保證成果。一切試劑都必須在運用前到達室溫20-25℃。運用后當即冷藏保存試劑。

　　2、洗板不正確能夠導致不的成果。在加入底物前確保盡量吸干孔內液體。溫育過程中不要讓微孔枯燥掉。

　　3、消除板底殘留的液體和手指印，否則影響OD值。

　　4、底物顯色液應呈無色或很淺的色彩，現已變藍的底物液不能運用。

　　5、防止試劑和標本的穿插污染以免形成錯誤成果。

　　6、在儲存和溫育時防止強光直接照射。

　　7、平衡至室溫后再打開密封袋以防水滴凝聚在冷板條上。

　　8、任何反響試劑不能觸摸漂白溶劑或漂白溶劑所散發的強烈氣體。任何漂白成分都會損壞試劑盒中反響試劑的生物活性。

　　9、不能運用過期產品。

　　10、假如可能傳播疾病，一切的樣品都應管理好，按照規定的程序處理樣品和檢測設備。